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技術(shù)文章

唾液酸分析指南,Ludger可提供唾液酸分析服務(wù)

技術(shù)文章

唾液酸分析指南如下,Ludger公司可以提供唾液酸分析的技術(shù)服務(wù)


NeuAc(唾液酸)和NeuGc(神經(jīng)氨酸)的定量分析是監(jiān)管機構(gòu)在生物制藥表征的產(chǎn)品標(biāo)準規(guī)格指南中提出的一個要求。特別是,人類和非人類的唾液酸 (NeuAc / NANANeuGc / NGNA分別)相對水平測定是非常重要的,因為有些病人有高水平的抗神經(jīng)氨酸(anti-NeuGc)抗體,這可導(dǎo)致中和反應(yīng)和快速清除含有神經(jīng)氨酸(NeuGc)的生物藥品 (Nguyen,2005)。


由于唾液酸(NeuAc)和神經(jīng)氨酸(NeuGc)在分析糖蛋白中具有重要意義,它通常被認為是生物治療藥物的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQA)。


較廣泛的唾液酸(NeuAc)和神經(jīng)氨酸(NeuGc)比例確定方法是如下:

    1. 通過輕度酸水解放糖蛋白上的唾液酸殘基。

    2. 用1-1,2 - 二氨基-4,5 - 亞甲基苯酚(DMB)熒光標(biāo)記釋放的唾液酸。

    3. 通過液相色譜法(HPLC)或超液相色譜法(UHPLC)對DMB標(biāo)記的唾液酸進行相對定量分析。


LudgerDMB標(biāo)記試劑盒(貨號:LT-KDMB-A1),提供從糖蛋白釋放唾液酸并用DMB標(biāo)記的所有功能。該試劑盒包含可以檢測高達22個糖蛋白樣品(每樣品含50-100 μg糖蛋白)的試劑和材料。每個標(biāo)記可標(biāo)記每個樣品中大約10 pmol2.5 nmol的唾液酸。

    

試劑盒中包含一系列唾液酸的參考標(biāo)準品(含Neuc,Neu5GcNeu5,7Ac2,Neu5,Gc9Ac,Neu5,9Ac2Neu 5,7,8),9Ac3Gc),以及NeuAcNeuGc的定量標(biāo)準品。這三個標(biāo)準品可以隨著釋放的唾液酸樣品進行DMB標(biāo)記。


系列稀釋液制備后的NeuAcNeuGc定量標(biāo)準品可用于定量分析。LudgerTag?DMB試劑盒中有提供關(guān)于如何制備的說明. 如有需要NeuAcNeuGc定量標(biāo)準品也可在另行購買,請跟我們。


作為陽性對照,我們建議使用包含NeuAcNeuGc唾液酸的胎球糖蛋白,我們同樣建議使用zui純化的LudgerBioQuantTM糖肽標(biāo)準品來作為陽性對照。這個糖肽標(biāo)準品(貨號: BQ-GPEP-A2G2S2-10U)是一個復(fù)雜的N-連接雙觸角聚糖,終止于兩個N-乙酰神經(jīng)氨酸。


使用此標(biāo)準品可以檢查聚糖釋放、標(biāo)記和回收的有效性,并可增強您的唾液酸測量準確性。Ludger還銷售可用于識別Neu5,9Ac2的標(biāo)準品。水可以作陰性對照。


1:由LS-UR2 UHPLC色譜柱(貨號LS-UR2-2.1x100)分析出來的DMB-標(biāo)記唾液酸對照品。

為了檢測聚糖的分離該對照品也可以作為跑樣之前的系統(tǒng)適用性標(biāo)準品。



唾液酸分析相關(guān)產(chǎn)品

商品型號

英文品名

中文品名

包裝

LT-KDMB-A1

DMB Sialic Acid Labeling Kit

DMB 唾液酸釋放標(biāo)記試劑盒

1Reaction Set

LS-R1-4.6x150

Ludger Sep R1 HPLC Column

R1 HPLC 色譜柱-唾液酸

4.6 x150 mm

LS-UR2-2.1x100

Ludger Sep UR2 UHPLC Column–sialic acids

UR2 UHPLC 色譜柱-唾液酸

2.1 x 100 mm

CM-NEU-AC-01

N-acetylneuraminic acid quantitative standard

N-乙酰神經(jīng)氨酸定量標(biāo)準品

1 nmol

CM-NEU-GC-01

N-glycolyneuraminic acid quantitative standard

N-羥乙酰神經(jīng)氨酸定量標(biāo)準品

1 nmol

CM-NEU5,9,AC-01

N-acetylneuraminic acid qualitative standard

N-乙酰神經(jīng)氨酸定性標(biāo)準品

1 nmol

BQ-GPEP-A2G2S2

A2G2S2 glycopeptide standard

A2G2S2 糖肽標(biāo)準品(用于唾液酸釋放和標(biāo)記過程)

10 μg

GCP-FET-50U-X4

Fetuin Glycoprotein (4 x 50 ug)

胎球糖蛋白(4×50微克)(唾液酸化陽性對照)

4 x 50 μg


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